收好这一份层析柱使用指南，帮您在实验过程中从容应对各种突发状况，更好的完成实验操作。
 

　　1.层析柱进气泡怎么办？
 

　　空气进入，如缓冲液走空，连接进入系统过程中
 

　　○ 用纯水反向冲洗，如果有柱位阀可直接切换流向，没有的话可将柱子反接
 

　　○ 对于大多数层析柱来说可用乙醇冲洗，以提高排气效率
 

　　缓冲液中有气泡
 

　　○ 上柱前将缓冲液脱气
 

　　○ 在缓冲液入口使用空气感应器
 

　　温度影响，如在冷室操作后马上在室温操作，或低温缓冲液直接在室温使用
 

　　○ 将缓冲液在使用前达到热平衡
 

　　2.层析柱干了还可以再使用吗？
 

　　○ 通常不可以，但也取决于具体的纯化需求。
 

　　3.胶平面与柱头有间隙怎么办？
 

　　由于不当装填或者筛网孔径与填料粒径不匹配，导致填料漏出
 

　　○ 更换筛网，重新装填，层析柱堵塞，导致反压增大
 

　　○ 根据说明书清洗
 

　　○ 更换滤膜
 

　　○ 样品上柱前先澄清
 

　　柱床装填太差，装柱过程中未有效压缩填料
 

　　○ 调整柱头高度，测柱效填料被用于条件，如有机溶剂
 

　　○ 检查缓冲液，选择合适的缓冲液条件
 

　　4.怎样避免由于样品导致的压力增大？
 

　　颗粒性物质——堵塞滤膜和层析柱
 

　　○对于滤膜吸附较高的的样品，体积较小时，可以用离心代替过滤，比如10000g离心15分钟
 

　　○ 细胞裂解液可50000g离心30分钟
 

　　○ 可以使用醋酸纤维素膜或者PVDF膜，其对蛋白的非特异性吸附较低
 

　　○ 选择合适孔径的滤器
 

　　沉淀或者聚体堵塞层析柱
 

　　○ 过滤
 

　　○ 通过改变pH，加盐或添加剂稳定样品或减少聚体产生
 

　　○ 避免机械压力和过高的蛋白浓度
 

　　核酸——过高粘度可能会封闭填料上的配基
 

　　○ 加入核酸酶
 

　　○ 使用硫酸链霉素，聚乙烯亚胺或硫酸鱼精蛋白沉淀
 

　　脂类——可能封闭填料上的配基或堵塞滤膜和层析柱
 

　　○ 离心
 

　　○ 使用硫酸铵，硫酸葡聚糖或PVP沉淀